产品货号：
WE0175
中文名称：
柱式小量血液基因组DNA提取试剂盒(0.1～20ml)
英文名称：
Blood gDNA Mini Extraction Kit(0.1-1ml)
产品规格：
50T|200T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的血液样品)、血浆、血清、血沉棕黄层、淋巴细胞、无细胞体液等样本中提取总DNA，包括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本制品可以处理0.1～1mL的全血，最高得率可达30μg，可纯化获得大小为100bp到50kb的DNA，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot等实验。
| 组分 | 50次 | 200次 |
| Buffer RCL | 125mL | 2×260mL |
| Buffer GR | 15mL | 50mL |
| Buffer GL | 15mL | 50mL |
| Buffer GW1(浓缩液) | 13mL | 52mL |
| Buffer GW2(浓缩液) | 15mL | 50mL |
| Buffer GE | 15mL | 60mL |
| 蛋白酶K | 12.5mg | 50mg |
| 蛋白酶K储存液 | 1.25mL | 5mL |
| 吸附柱DM及收集管 | 50套 | 200套 |
保存：室温，其中Buffer RCL需2～8℃保存
无水乙醇
- 向Proteinase K中加入1.25mL或5mL的Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
- 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
- 本试剂盒最多可以提取0.1～1mL全血样品或1×107个白细胞。
- 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
- 使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴孵育重新溶解。
- 试剂盒中的Buffer RCL浑浊后不能继续使用。
- 样品处理：
- 提取200μL血液样品时，向离心管（自备）中加入样本后，可直接进行下一步实验。
- 当血液样本量小于200μL时，加入Buffer GR补足至200μL，再进行下一步实验。
- 当血液样本量超过200μL时，加入1～2.5倍体积的Buffer RCL，轻轻涡旋或颠倒混匀，12000rpm（~13400×g）离心1分钟，小心吸弃上清液，如果沉淀中还有红色，可以重复以上步骤一次。然后向沉淀中加入200μL Buffer GR，震荡至彻底混匀，再进行下一步实验。
- 如果处理血液样本为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血，其红细胞为有核细胞，血液样本量为5～20μL，可加入Buffer GR，补足至200μL后进行后续实验。
注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4μL RNase A（100mg/mL）溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购RNase A溶液(100mg/mL)(货号：WE0225)。
- 提取200μL血液样品时，向离心管（自备）中加入样本后，可直接进行下一步实验。
- 向以上溶液中加入20μL Proteinase K，混匀。
- 加入200μL Buffer GL，震荡至彻底混匀。
注意：不要将Proteinase K和Buffer GL进行预混。 - 56℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。
注意：孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。 - 加入200μL无水乙醇，颠倒混匀数次。短暂离心，使管壁和壁盖上的液体集中到管底。
- 将步骤5所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
- 向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否加入无水乙醇）,12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤7。 - 向吸附柱中加入500μL Buffer GW2（使用前检查是否加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。 - 12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。 - 将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入50～200μL Buffer GE或灭菌水，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：- 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
- 如果要提高DNA的终浓度，可以将所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟。
- 因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
- 如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。
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